近紅外光譜法鑒別真?zhèn)蔚膽?yīng)用一致性檢驗是一種快捷的圖譜比較方法，用于比較未知光譜與某一組參考光譜是否具有一致性：首先計算參考光譜在每個波長點處吸光度的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差，其次將每個波長點的平均值加減多少倍(即CI限度)標(biāo)準(zhǔn)偏差作為該波長點的可信區(qū)間;待測光譜在該波長點處的吸光度與參考光譜平均值的差值除以標(biāo)準(zhǔn)偏差，得到的就是一致性指數(shù)(conformityindex，CI)。根據(jù)待測樣品光譜的CI值是否超過CI限度，即該光譜是否越過可信區(qū)間，可快速判斷待測樣品是否可疑[1]。本文利用近紅外光譜測定和數(shù)據(jù)分析軟件建立消渴丸的一致性檢驗?zāi)Ｐ停瑫r利用顯微特征鑒別和高效液相色譜法，確定樣品真?zhèn)危赃M(jìn)一步驗證該模型的準(zhǔn)確性。

　　1儀器與樣品

　　1.1儀器

　　MatrixF近紅外光譜儀、手持1.5m固體光纖探頭(德國布魯克光譜儀器公司);OPUS5.0光譜分析軟件(德國布魯克光譜儀器公司);LC20AT高效液相色譜儀(日本島津);LeicaCME電光顯微鏡(德國徠卡公司)。

　　1.2樣品

　　消渴丸**17批(編號：1-17，對應(yīng)批號為MY0074、M07018、M01315、LY0077、L00677、K03189、M00279、MF0014、M01383、M01375、M01367、M01341、M00313、M00287、M07001、M00295、MO1354，均來自廣州中一藥業(yè)有限公司);標(biāo)示消渴丸假冒品4批(編號：18-21，對應(yīng)標(biāo)示批號為：L00462、L00579、L03073、L05628)。

　　2實驗方法

　　2.1近紅外光譜采集條件

　　掃描范圍：4000～12000cm-1;掃描次數(shù)：32;分辨率：8cm-1;掃描速度：10kHz;以內(nèi)置背景為參考;檢測器設(shè)置：半導(dǎo)體制冷銦鎵砷探測器;采樣模式：漫反射方式;溫度、濕度：22℃，60%。

　　2.2近紅外光譜采集和處理

　　2.2.1取樣品(濃縮水丸)，用銼刀銼成較光纖探頭直徑稍大的橫截面，探頭直接接觸切面采集光譜，每批重復(fù)測定4次。在OPUS的一致性檢驗?zāi)Ｐ驮O(shè)置模塊中，取編號1-14樣品的近紅外光譜作參考光譜，見圖1。另取編號15-21樣品近紅外光譜作驗證光譜，只選擇矢量歸一化預(yù)處理數(shù)據(jù)，取4061.7～8516.8cm-1譜段范圍，設(shè)定CI限度為6，建立樣品的一致性檢驗?zāi)Ｐ汀?/span>

　　2.2.2在不同條件下近紅外光譜采集，取編號14樣品，按不同操作者，不同溫度、濕度環(huán)境(22℃、60%，28℃、75%)，不同測量深度(截面大、中、小)采集光譜，各重復(fù)測定3次。

　　2.3顯微特征鑒別

　　取編號8、18、19、20、21樣品，磨粉，取適量制片，按2010年版《中國藥典》[2]置顯微鏡下觀察。

　　2.4高效液相色譜圖

　　取編號8、18、19、20、21樣品粉末，按2010年版《中國藥典》“消渴丸”含量測定項下的方法[2]，掃描高效液相色譜圖。

　　3結(jié)果

　　3.1**與假冒品近紅外光譜圖的區(qū)別

　　在OPUS中，將**與假冒品近紅外原始光譜圖矢量歸一化預(yù)處理(見圖2)。可見，編號19、20假冒品與**近紅外光譜曲線差異較大，編號18、21假冒品與**的光譜圖相似，但在4200、5500、

　　3.2建立一致性驗證模型

　　取編號1-14樣品的近紅外光譜作建模參考光譜，另取編號15-21樣品作為驗證光譜，結(jié)果見圖3。從圖3可見，編號18-21假冒品均在所設(shè)定的CI限度以上，超出建模樣品光譜圖的可信區(qū)間;驗證編號15-17**在CI限度以下，跟建模樣品一致。驗證的結(jié)果與樣品實際情況相符。

　　3.3模型耐用性驗證

　　取在不同條件下近紅外光譜作為驗證光譜，結(jié)果見圖4。不同操作者，不同溫度、濕度環(huán)境，不同測量深度等變化下測定的光譜，經(jīng)計算均在所設(shè)定的CI限度之下。驗證結(jié)果說明上述因素變化對模型判別影響不大。

　　3.4顯微鑒別結(jié)果

　　對編號8、18-21樣品進(jìn)行顯微特征觀察后發(fā)現(xiàn)，編號8樣品(**)符合《中國藥典》描述的顯微特征;編號18-21樣品(假冒品)部分具有《中國藥典》描述的顯微特征，但同時可見摻有大量無機(jī)物，顯微特征與**有明顯不同;另外，編號18樣品可見葛根顯微特征,屬于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定外的顯微特征。

　　3.5高效液相色譜圖的差異

　　為進(jìn)一步求證，取消渴丸**和假冒品掃描高效液相色譜圖，見圖5。從圖可見，編號8樣品(**)在保留時間9.60min處有色譜特征峰，編號18假冒品有特征峰，編號18-21假冒品在9.6min沒有特征峰。

　　4討論

　　4.1近紅外光譜檢測屬于無污染和無損傷低碳環(huán)保檢測技術(shù)，樣品不需特別的預(yù)處理，不使用有毒有害試劑;掃描過程迅速，數(shù)十秒內(nèi)獲得一個樣品的全光譜圖;通過數(shù)據(jù)分析軟件可以很快建立各種數(shù)學(xué)模型，在不同情況中使用[3]。

　　4.2一致性檢驗是一種近紅外光譜定性檢測方法，在打擊假冒藥品時有較好的專屬性、準(zhǔn)確性，但模型建立需要一定代表性的參考光譜，事先需要準(zhǔn)備一定量的樣品[1，4]。

　　4.3藥品的近紅外圖譜是活性成分和輔料的疊加圖譜，不管是活性成分改變還是輔料改變，近紅外圖譜都將發(fā)生改變[5]。顯微鑒別時，某假冒品和**同樣都具有藥材的顯微特征，但如果輔料不同，近紅外圖譜仍有較大差異。

　　4.4通過掃描高效液相色譜圖，發(fā)現(xiàn)假冒品(編號18)和**在保留時間9.6min左右有相同的色譜峰(葛根素)，高效液相色譜圖有相似點，但是通過顯微特征和近紅外圖譜分析，可以將兩者區(qū)分，篩選出假冒品。隨著藥品造假手段越來越高明，多種檢驗技術(shù)的采用可從多個層面驗證藥品的真假。